Terminación de la transcripción
La transcripción va más allá del punto donde se añadirá la secuencia de poli A en el RNA. No está claro si existe señales de terminación. En algunos genes parecer ser que sí hay zonas de terminación, pero en otros parece ser que no. Por lo visto, son zonas ricas en T, lo que podría provocoar el final de la transcripción. Mecanismos de splicing Podríamos distinguir 3 tipos de splicing, a grandes rasgos: • Reconocimiento de secuencias consenso al inicio y final de cada intrón, donde limita con los exones. • Autosplicing. Es un proceso por el cual el RNA elimina por sí mismo una secuencia intrónica. Se da en muy pocos genes, como en algunos delos grupos I y II. • Reconocimiento de una conformación característica. Se da en el proceso de maduración de los tRNA que poseen intrones.
PROCESOS DE MADURACIÓN
El resultado de la acción de la RNA polimerasa II es un RNA heterogéneo, o transcrito primario. Este transcrito deberá pasar por un proceso de maduración antes de ser el producto definitivo. Capping El RNA maduro eucariota necesita un capping en el extremo 5’. Consiste en la adición del 7 metilguanilato en el extremo 5’ de la cadena, impidiendo así que haya extremos 5’ libres en la cadena. Actúan una serie de enzimas, como la guaninil transferasa, que añade el guanilato; la guanil – 7 – metil transferasa, que metila el guanilato en la posición 7; y por último, la 2’ – O – metil transferasa, que es capaz de metila grupos en posición 2’ O. El capping es necesario para iniciar la traducción, ya que sin capping, no se podrá traducir. Se cree que el capping puede influir en el transporte del RNA y que además le puede proteger contra una posible degradación. Poli A LA mayoría del RNA eucariota tienen una cola de 20 a 200 As, que no están codificadas por la secuencia de DNA, sino que se añaden después. Para que se produzca la adición de A es necesaria la presencia de una secuencia concreta, que es la señal AATAAA, en el DNA. Está situado entre 10 y 30 pb de distancia de CA, donde se producirá el corte. Se ha visto que existen zonas de GTGT a 10 – 30 pb en dirección de CA, en dirección 3’. Hacen falta una serie de factores para que se produzca la adición de poli A.
• CFI y CFII ( Cleavage factor): son los factores que tienen actividad endonucleasa y permiten cortar el RNA. • CPSF ( Clevage poly adenilation stimulating factor): reconocerá la secuencia AAUAAA. • CstF: Se une a la región rica en GU. • Poli A polimerasa: sintetia la cola de poli A. • PAB (poly A binding protein): provoca que se de la adición de A a la secuencia de RNA. Si mutase la secuencia AATAAA, no se produciría la cola de poli A, a la ve que tampoco se podría producir una correcta terminación de la transcripción. No se producirá una correcta terminación si la polimerasa no pasa por la señal de poli A. Es posible que sea debido a algún factor antiterminador, unido a la polimerasa, que al pasar por esta señal se liberase. Es posible tambien que la polimerasa no tenga antiterminador, sino que funcione sin él, lo que provocaría que una parte de los transcritos que se sintetizasen fuesen incompletos. Se cree posible que el factor antiterminador pueda ser el TFIIS.
Genes de clase III
Son reconocidos por la polimerasa III. Sus productos son muy heterogéneos, como tRNAs, rRNA 5s, smRNA como U6, o AluRNA. Podemos diferenciarlos según su procesamiento. Todos los RNA con excepción de los tRNAs no tienen procesamiento. El gen del rRNA 5s se sintetiza a partir de genes repetidos. Todos tienen estructuras muy conservadas. tRNAs Constituye el 15% del RNA total de las células eucariotas. Constan de entre 70 y 80 nucleótidos, pero deberán pasar por un procesamiento, donde podrán perder algunos nucleótidos de los extremos y donde se le añadirá en el extremo 3’ el CCA, donde se unirá el AA. Un elevado porcentaje de bases de estos RNAs son bases modificadas. En muchos casos existe un intrón central en el RNA. Promotores de los genes de clase III Existen 2 tipos de promotores en estos genes, los promotores internos y los promotores no internos. Encontramos promotores internos en los tRNA y en el rRNA 5s. Los promotores no internos se dan en el resto de los genes de esta clase. Se descubrieron cuando se observó que se podía eliminar toda la parte anterior a +1 en un gen, sin que la transcripción de este se viese afectada. Los genes que tienen promotores no internos tienen promotores similares a los de la clase II, tienen incluso caja TATA. Hacen falta los TFIIIA, TFIIIB, y TFIIIC para transcribir el 5s, mientras que solo C para los de transferencia. De nuevo, TFIIIB está formado por TBP y otros factores. En el caso del rRNA 5s se une en primer lugar TFIIA, después TFIIIC y finalmente TFIIIB, al que se unirá la polimerasa. Parece ser que al unirse la polimerasa e iniciarse la transcripción, se desprenderán los factores, con excepción de TFIIIB. La proteína TFIIIA es una proteína con dominio de unión al DNA por dedos de Zn. En el caso de la transcripción de los tRNA no es necesario el factor TFIIIA, sino que solo TFIIIC y TFIIIB podrán transcribir ya. Parece ser que la polimerasa se detendrá al llegar a una determinada región, rica en TA, entre zonas de GC.
