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PROCESOS DE MADURACIÓN

PROCESOS DE MADURACIÓN

El resultado de la acción de la RNA polimerasa II es un RNA heterogéneo, o transcrito primario. Este transcrito deberá pasar por un proceso de maduración antes de ser el producto definitivo. Capping El RNA maduro eucariota necesita un capping en el extremo 5’. Consiste en la adición del 7 metilguanilato en el extremo 5’ de la cadena, impidiendo así que haya extremos 5’ libres en la cadena. Actúan una serie de enzimas, como la guaninil transferasa, que añade el guanilato; la guanil – 7 – metil transferasa, que metila el guanilato en la posición 7; y por último, la 2’ – O – metil transferasa, que es capaz de metila grupos en posición 2’ O. El capping es necesario para iniciar la traducción, ya que sin capping, no se podrá traducir. Se cree que el capping puede influir en el transporte del RNA y que además le puede proteger contra una posible degradación. Poli A LA mayoría del RNA eucariota tienen una cola de 20 a 200 As, que no están codificadas por la secuencia de DNA, sino que se añaden después. Para que se produzca la adición de A es necesaria la presencia de una secuencia concreta, que es la señal AATAAA, en el DNA. Está situado entre 10 y 30 pb de distancia de CA, donde se producirá el corte. Se ha visto que existen zonas de GTGT a 10 – 30 pb en dirección de CA, en dirección 3’. Hacen falta una serie de factores para que se produzca la adición de poli A.

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• CFI y CFII ( Cleavage factor): son los factores que tienen actividad endonucleasa y permiten cortar el RNA. • CPSF ( Clevage poly adenilation stimulating factor): reconocerá la secuencia AAUAAA. • CstF: Se une a la región rica en GU. • Poli A polimerasa: sintetia la cola de poli A. • PAB (poly A binding protein): provoca que se de la adición de A a la secuencia de RNA. Si mutase la secuencia AATAAA, no se produciría la cola de poli A, a la ve que tampoco se podría producir una correcta terminación de la transcripción. No se producirá una correcta terminación si la polimerasa no pasa por la señal de poli A. Es posible que sea debido a algún factor antiterminador, unido a la polimerasa, que al pasar por esta señal se liberase. Es posible tambien que la polimerasa no tenga antiterminador, sino que funcione sin él, lo que provocaría que una parte de los transcritos que se sintetizasen fuesen incompletos. Se cree posible que el factor antiterminador pueda ser el TFIIS.

Promotores de los genes de clase II

Promotores de los genes de clase II

La RNA polimerasa II no puede iniciar la transcripción ella sola. Necesita factores de transcripción. El conjunto conformará lo que se ha llamado aparato de transcripción. Dentro del promotor habrá una serie de zonas más conservadas que otras. Promotor genérico Veremos ahora lo mínimo que se necesita para iniciar la transcripción. Los factores que necesita la polimerasa para iniciar la transcripción son los factores basales o iniciales, conocidos como TFI, TFII,…, de transcription factor. Un promotor genérico funcionará a una frecuencia más baja que otros promotores. Se necesitarán otras secuencias, reconocidas por otros factores para alcanzar una tasa de transcripción más eficaz. Algunas posibilidades de promotores son Pyr2CAPyr5, o bien PyrCAPyr2. Estas son dos secuencias iniciadoras, donde Pyr quiere decir pirimidina y Pur, purina. Esta es la forma más simple que puede ser reconocida por la RNA polimerasa. En muchos casos encontraremos también la TATA box, situada en –25. Es el único elemento regulador que tiene una posición fija. Se trata de una secuencia consenso, bastante estable. Es similar a la Pribnow box, determinando donde empieza la transcripción. Se han localizado una serie de genes que parece ser que carecen de la caja TATA. Cada día se conocen más de estos genes. Se les conoce como genes “House Keeping”. Estos genes se expresan en todas las células y entre ellos podemos encontrar algunos componentes del ciclo de Krebs. La iniciación de la transcripción requerirá la correcta asociación de los factores de transcripción, en un orden determinado. El primer factor que se unirá será TFIID, compuesto por: • TBP: TATA binding protein. Se une a la caja TATA. Se trata de una proteína pequeña, que desempeña un papel posicionador. • TAFs: TBP additional factors. El siguiente factor que se unirá será TIFA, al que seguirá el TFIIB. A continuación vendrá TFIIF, compuesto por 2 subunidades, la grande, que parece ser que es la que posee actividad helicasa, ya que parece ser que se romperá la cadena para poder iniciar la transcripción; y la pequeña que se une a la RNA polimerasa II. Llegados a este punto es cuando la polimerasa establece el contacto TFIID intecaccionará con el dominio C terminal de la polimerasa II, a la ve que parece ser que TFIIB también contacta. Hasta este punto, se ha estado preparando para transcribir, pero todavía hacen falta más factores para iniciar la transcripción. Se unirán todavía TFIIE y TFIIS, y por último TFIIH, que parece presentar 3 funciones diferentes: helicasa, quinasa, fosforilando el dominio CTD de la polimerasa, y parece estar involucrado en la reparación. Al fosforilar TFIIH el dominio CTD, se desprenderán la mayoría de los factores, y solo quedará unido el TFIIH, momento en que la polimerasa empieza a transcribir. El TFIIS es un gen que evita la terminación prematura, es un factor de elongación. En los genes sin caja TATA se requieren los mismos factores que los vistos hasta ahora, incluso TFIID. Existen teorías que afirman que TFIID puede reconocer el inicio de la transcripción, mientras que otras teorías afirman que hay algún factor que reconoce el inicio y es, a su vez, reconocido por TFIID.

Inducción

Inducción

Para volver al ciclo vírico harán falta Xis e Int. Entre Int y Sib está la zona d erecombinación entre el fago y la bacteria, para la zona attB. Sib quedará por lo tanto al lado contrario de Xis e Int, por lo que el RNA no se degradará como se ha descrito antes. En el caso de este fago λ, se produce una modificación de la polimerasa por acción de las proteínas antiterminadoras, para poder pasar a transcribir otros genes. En el caso del fago Sp01, de B.subtilis, se produce una modificación de la polimerasa a nivel de la incorporación de una nueva σ, que reconocerá otros genes. Este es el caso también del fago T4. En el caso de los fagos T3 y T7, se produce una nueva RNA polimerasa, producto de los genes tempranos, de manera que se reconocerán los promotores del DNA, de los siguientes bloques de genes.